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竞争 ELISA法是一种简便易行的亲和力测定方法。原理是抗体与不同浓度的抗原在水溶液中混合孵育达到平衡后,未结合的抗体被微孔板中包被的抗原捕获,并通过 ELISA方法检测出来。目前，常用的检测亲和力的方法有很多，但其中大多数要么依赖昂贵的设备（表面等离子体共振），要么不普遍适用（荧光修饰、透析）或者需要修饰的抗原（放射性沉淀标记的抗原）。而竞争ELISA法测定亲和力则是例外，它仅依赖于少量纯化抗原和抗体即可进行亲和力的检测。

w66最给力的老牌生物（KMD Bioscience）致力于亲和力检测研究，能够给客户提供专业、有效的售前技术咨询和准确的数据支撑，为客户的实验项目提供强有力的保障。

竞争ELISA法原理：

竞争法ELISA（也称抑制或封闭法ELISA）通过定量某种样品分析物对预计信号的干扰，来测定该分析物在样品中的含量。

抗原抗体的结合是一个可逆的反应：A+B ⇋AB（A表示抗体，B表示抗原，AB表示抗原抗体结合物）。当反应达到平衡时，解离常数Kd=[A][B]/[AB]，[AB]表示反应平衡时抗原抗体结合物的浓度，[A]表示反应平衡时游离抗体的浓度，[B]表示反应平衡时游离抗原的浓度。

① 当反应体系中抗体很少，而抗原过量时，反应平衡后[AB]>[A]；

② 当反应体系中抗原量很少，而抗体过量时，反应达到平衡后[AB]<[A]；

③ 当反应体系中抗原抗体的量刚好合适时，反应达到平衡后处于半饱和状态，此时[AB]=[A],则Kd=[A][B]/[AB]=[B]。

在半饱和状态下，如果抗体的浓度很低，反应消耗的抗原很少，则反应后游离的抗原浓度[B]约等于总的抗原浓度[B]总，此时Kd=[B]≈[B]总。因此，只要在抗体浓度较低的情况下，找到可以在反应平衡后达到半饱和状态的抗原浓度[B]总，便可以得到解离常数。

竞争法的基本过程是选择少量的靶点分子和能够占据该靶点分子80%结合位点的标记的信号分子，加入梯度稀释的待测样品，将三者进行混合反应后检测靶点分子-信号分子复合物的信号值，绘制待测样品浓度和信号的剂量曲线，该曲线往往是反S型，得到IC50值，IC50越小，说明该待测样品和靶点分子的亲和力越强。

图1 竞争ELISA原理示意图

技术特点：

-- 无需样品处理，可检测原油或不纯的样品

-- 重复性好：重复样品和分析之间的差异更小

-- 灵活性高：可基于直接、间接或夹心ELISA

-- 更稳健：对样品稀释和样品基质效应的敏感性低于夹心ELISA

样品要求：

服务优势：

--专业的技术团队和丰富的技术经验

--检测效率高，无需标记、实时监测

--先进的仪器设备

--应用范围广泛：可用于蛋白、核酸、多肽、纳米材料等分子互作分析

--提供真正的一站式服务：提供从亲和力测定服务，到分子互作研究的一体化解决方案

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