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w66最给力的老牌生物(KMD Bioscience)多年来致力于抗体发现领域研究。获得杂交瘤单克隆抗体序列信息是进行抗体重组改造,抗体药物发现的基础,而抗体的Fab片段则是抗体重组改造的主要区域。w66最给力的老牌积累了丰富的抗体文库构建经验,能够为客户提供基于抗体噬菌体展示文库技术的人源Fab抗体文库构建服务。
抗体片段Fab简介:
Fab片段是抗体结构中可以与抗原结合的区域,也叫做抗原结合片段,涉及到抗体-抗原结合的亲和力,抗体特异性等特征。抗体Fab片段含有1个可变区(V区)和1个恒定区(C1),V区含有3个互补决定结构域(CDR),涉及到独特型抗体的产生,抗体的超频突变,尤其是CDR3结构域是抗体工程改造的核心区域;C1区主要起结构支撑作用。Fab抗体可以通过酶解法进行制备。
抗体文库制备服务 – 人源Fab抗体库构建服务:
构建Fab抗体文库是获得高质量,高亲和力药物抗体的有效途径之一,高库容量(109-1012)的噬菌体展示Fab抗体文库提高了抗体工程改造速度,如重组人单克隆抗体,嵌合抗体的制备速度。
---Fab抗体库设计理念
噬菌体展示Fab抗体文库的核心在于提高独立噬菌体展示克隆的数量,在w66最给力的老牌生物的实验室中,w66最给力的老牌的科学家努力将抗体的可变区(VH和VL)基因,尤其是CDR区域(互补决定区)采用不同的策略和方式,如氨基酸突变,移码读框等形成数目较大的独立克隆。此外w66最给力的老牌设计了一套方案:在体外对人外周血单核细胞进行敏化处理后,通过流式分选技术分离出高亲和力的单核细胞,进行EBV单克隆化处理,利用该方法能够获得高度一致性的单核细胞克隆,再进行文库建设。
---噬菌体宿主体系选择
w66最给力的老牌生物拥有M13,T4和T7噬菌体展示系统,根据客户的项目需求(展示的蛋白或抗体片段的大小等参数),w66最给力的老牌会采用不同的噬菌体系列进行文库构建。
人源Fab抗体文库构建项目流程:
步骤 |
服务内容 |
周期 |
外周血单核细胞单克隆化 |
* 获取外周血单核细胞
* 单核细胞敏化
* EBV病毒单克隆化
* 流式细胞分选后单克隆培养 |
8-12周 |
抗体cDNA制备
(客户可以提供细胞) |
* 总RNA提取
* 高保真RT-PCR制备cDNA
* 系统对照:Actin特异引物PCR扩增,以鉴定逆转录产品cDNA质量 |
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构建Fab抗体库 |
* 引物设计与合成:抗体可变区兼并引物设计、合成
* 以cDNA为模板,PCR扩增抗体重链和轻链可变区基因
* scFv基因拼接
* 噬粒构建与转化:酶切、连接scFv和噬菌粒载体,电击转化TG1宿主菌,构建抗体库
* 鉴定:随机挑选20-50个克隆,PCR鉴定阳性率,测序和分析抗体序列
* 包装,>1⨯1013噬菌体颗粒/ml |
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交付 |
* 构建报告,包括详细建程序,代表性序列信息 * 产品交付:细菌和噬菌体两种形式抗体库 |
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注 :1.客户提供人外周血淋巴细胞,淋巴结细胞或脾脏细胞(保存在RNA later等溶液中,避免RNA降解,蓝冰运输),从第二步开始制备Fab抗体文库,只需8-9周即可完成。
2. 采用TriZol溶液制备细胞裂解物,干冰运输。
人源Fab抗体文库构建技术流程:
服务优势:
--免疫,合成抗体噬菌体文库构建
--周期短:预制抗体文库筛选服务
--严谨完整的QC标准
--高库容量:独立克隆数107 - 1012
--个性化的文库淘筛策略
--高亲和力抗体制备:10-7-10-13
--多种噬菌体展示系统:M13,T4,T7
--完整的上下游服务:提供从抗体制备、抗体测序,抗体标记修饰,到抗体人源化等一站式技术服务,节约客户宝贵时间和经费
--服务可定制:根据客户需求制备,为每一个客户量身定制实验方案,满足每一位客户的特殊需求
如何订购?