w66最给力的老牌生物科技（天津）有限公司
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w66最给力的老牌生物（KMD Bioscience）从事微生物基因编辑多年，已拥有了完善的基因编辑技术平台，w66最给力的老牌的基因编辑技术平台拥有经验丰富的技术人员，有效的实验流程以及完善的实验设备。w66最给力的老牌的科学家可根据客户的具体需求进行一对一的方案定制，提供多种微生物的编辑服务，以满足客户的需求。
乳酸菌（lactic acid bacteria）是一类革兰氏阳性、不产芽孢、兼性厌氧、发酵多种碳源产乳酸的重要工业微生物之一。这类细菌在自然界分布极为广泛，具有丰富的物种多样性，至少包含18个属，共200多种。其绝大部分都是人体内必不可少的、且具有重要生理功能的菌群，广泛存在于人体的肠道中。 乳酸菌不仅是研究分类、生化、遗传、分子生物学和基因工程的理想材料（在理论上具有重要的学术价值），而且在工业、农牧业、食品和医药等与人类生活密切相关的重要领域具有很高的应用价值。随着乳酸菌工业化应用范畴的不断拓展，乳酸菌生理生化特性、酸耐受特性，代谢途径及产酸调控机理的研究受到广泛关注。因此，借助基因编辑技术来解析其代谢关键基因及基因网络的功能、调控代谢途径十分必要。
传统λRed同源重组法：
乳酸菌基因敲除的传统方法是利用其自身的Rec A同源重组系统编码的RecA和RecBCD蛋白介导DNA的同源重组。Rec BCD能够解开DNA双链，并形成单链，Rec A酶能够识别同源序列并在Rec BCD及其他酶辅助下，实现链交换，完成同源重组。
但是以该系统为基础的基因打靶存在一些缺点：Rec BCD会降解线性DNA，故该基因改造策略通常会将靶基因上下游同源序列或不完整的靶基因序列整合到质粒上，构建出重组载体，转入宿主菌，敲除或敲入靶基因，并且打靶片段需要较长的同源臂，往往长达几百个碱基，而且同源重组效率低，往往不能得到所需的重组子。
图1 传统λRed同源重组法
CRISPR/Cas9基因编辑技术：
CRISPR-Cas9基因编辑技术就是通过人工设计的 sgRNA（guide RNA）来识别目的基因组序列，并引导 Cas9 蛋白酶进行有效切割 DNA 双链，形成双链断裂，损伤后修复会造成基因敲除或敲入等，最终达到对基因组DNA 进行修饰的目的。已有研究表明，乳酸菌自身存在CRISPR/Cas9系统，证实该系统在乳酸菌上应用的可能性。相较于传统的同源重组敲除基因的方法，CRISPR-Cas9基因编辑技术速度更快，无痕，结果更准确，非常便于您开展后续的实验研究。
图2 CRISPR/Cas9基因编辑技术
服务内容：
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服务内容 |
周期 |
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基因敲除 |
客户提供： * 需改造的菌株信息：模式菌株/野生型菌株 * 敲除的序列信息：NCBI查询编号 |
2-5个月 |
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基因敲入或点突变 |
客户提供： * 需改造的菌株信息：模式菌株/野生型菌株 * 敲入的序列信息/突变位点信息 |
2-3个月 |
w66最给力的老牌生物科技多年致力于微生物基因组编辑服务，主要可为您提供传统λRed同源重组法和CRISPR/Cas9技术实现高度准确和有效的无痕基因组编辑。我司提供的微生物基因编辑系统主要包括大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、沙门氏菌、毕赤酵母、酿酒酵母、白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和乳酸菌等。您也可以根据自己的需求指定其他微生物菌属，具体情况还需与w66最给力的老牌专业的技术人员联系。
交付：
--经过基因编辑且验证正确的菌株（抗性验证或测序验证）
--原始数据及完整项目报告
服务优势：
--项目开始前详细的评估方案
--快速的实验周期，节省客户成本
--实验过程中按阶段反馈项目进展，及时与客户沟通项目，促进项目快速运转
--成熟的实验技术，实现无痕基因组编辑
--多种微生物的基因编辑系统，适用于客户的多种项目
--可为新微生物开发 CRISPR 方法提供有力的技术支持
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