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一．单B细胞抗体技术

单个B细胞抗体技术作为新一代抗体开发技术，可以从单个B细胞中高效、快速的分离抗体，是继杂交瘤、噬菌体展示后又一抗体产生技术的突破。它是根据每一个B细胞只含有一个功能性重链可变区DNA序列和一个轻链可变区DNA序列，以及每一个B细胞只产生一种特异性抗体的特性，从免疫动物组织或外周血中分离抗原特异性B细胞，通过单细胞PCR技术从单个抗体分泌B细胞中扩增IgG重链和轻链可变区基因，然后在哺乳动物细胞内表达获得具有生物活性的单克隆抗体。

二．单B细胞分选平台

该平台结合微流控和不同的分选技术，直接对B细胞进行单细胞水平的分离、分析与筛选，从而精准、高效的筛选出分泌目标抗体分子的B细胞，再结合单细胞测序技术，即可得到目标抗体序列。除了对动物进行免疫进行筛选以外，该技术可以使用对全人转基因小鼠进行免疫，筛选后直接获得全人抗体序列。常用的分选方法有以下几种：

1.MACS法（磁珠分选法）分选B细胞

原理是基于抗原抗体结合的特异性，B细胞表面分子与包被有特异性抗体的磁珠相结合，形成表面分子-抗体-磁珠复合物，在外加磁场中，通过抗体与磁珠相连的细胞被吸附而滞留在磁场中，不能与特异性抗体相结合的细胞由于没有吸附磁珠，不在磁场中停留，从而使细胞得以分离。该方法优点：操作简单、稳定、重复性好；缺点：用到的抗体种类较多、对磁珠与磁珠柱的质量要求较高、费用较高。该方法可以和其它分离方法配合使用。

2.FACS法分选B细胞

FACS法分选B细胞原理是基于抗原抗体的特异性反应，利用荧光素标记的B细胞表面分子的抗体，以及标记的特异性抗原，通过多色流式分析与分选的方法，筛选抗原特异性B细胞。FACS分选可以将单个抗原特异性B细胞分选入细胞培养板的单孔中，直接进行抗体基因的扩增与测定。该技术是目前应用较广泛的一种方法。优点：分离B细胞快速、准确、大量、多参数同时分析；缺点：费用高、通电磁场对细胞有一定损伤，会影响细胞活性。

3.微流控技术分选B细胞

结合微流控设备和芯片的技术是目前主流的商业化单B细胞平台。BLI公司（Berkeley Lights，Inc）的Beacon单细胞光导系统受到多家大型药企的青睐。Beacon平台是通过微流控系统将分泌抗原特异性抗体的细胞输送到芯片部位，并通过光电定位技术OEP将单细胞分离到芯片的各个小室中。而后采用基于磁珠的双色荧光结合实验检各细胞的分泌物，分泌抗原特异性抗体的细胞会产生荧光信号，被仪器识别，单个阳性细胞通过OEP技术被导出输送到96孔板中，进行进一步的测序、表达。该系统集单细胞分选和检测及分析为一体，灵敏度和准确度高。

三．扩增和克隆抗体基因

通常通过FACS法分离抗原特异性B细胞后，将其分选至含裂解液的96孔板中，裂解B细胞并释放细胞内RNA。随后通过RT-PCR、巢式PCR得到抗原特异性单个B细胞抗体可变区基因。

四．表达、筛选和鉴定抗原特异性抗体

FACS分选的单个B细胞抗体基因扩增、载体构建、抗体表达及活性验证是必要步骤。表达系统常用的是原核表达系统：例如大肠杆菌或真核表达系统。在大肠杆菌中，通常表达抗体的抗原结合片段（Fab），而在哺乳动物中，可以表达完整的IgG分子。抗体生物活性验证主要通过ELISA、间接免疫荧光、中和试验等常规方法来验证；除此之外，还可以通过流式分析法、免疫共沉淀、空斑法、空斑减少中和试验等方法来验证。

五．单个B细胞抗体制备技术应用

抗病毒治疗应用：利用单个B细胞抗体技术，从治愈后的患者血液中分选抗体分泌的单个B细胞，快速鉴定和表达抗体基因，特别是对于新型病毒的治疗和预防有很大帮助。许多单B细胞抗体对病毒的治疗正在临床试验阶段中。HIV引起获得性免疫缺陷综合征，全球已有6390万人感染，通过单B细胞技术已获得5种抗HIV包膜蛋白的抗体正在临床I/II期实验中进行评价。

神经性疾病治疗应用：偏头痛药物Vyepti是由单B细胞技术制备的兔抗体药物，靶向结合降钙素相关基因肽（CGRP）配体，阻断其对受体的结合作用。其II期临床结果显示许多患者的偏头痛天数可以减少75%。此外，该公司的另一种偏头疼药物ALD1910正处于临床前研究阶段。

免疫疾病治疗应用：单个B细胞抗体制备技术能够分离到人体内任意时期的B细胞，使得详细深入地研究人体免疫系统各个阶段功能和机理成为可能。对于自身免疫性疾病和其他免疫系统疾病治疗抗体研究有良好的应用前景。