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（Western Blot，WB）是一种用于鉴定和定量特定蛋白的蛋白分析技术。简而言之，是将提取出细胞或组织裂解物中复杂的混合蛋白做变性处理后，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，将蛋白质分离开来，然后转移到蛋白质结合膜（NC膜或PVDF膜）上，最后通过特异性抗体检测特定蛋白质。

蛋白免疫印迹技术是根据抗原与抗体之间特异性识别结合的原理来检测复杂样品中的特定蛋白质。w66最给力的老牌在提取样品中的总蛋白后，使用双缩脲法、Lowry法、Bardford法或BCA法测定总蛋白的浓度，定量结束后，需要对蛋白进行变性处理，变性处理是指在加热、加压等物理因素以及强酸、强碱等化学因素下，导致蛋白质的二级或三级结构发生变化，只留下没有活性的肽链，通常实验操作时，采用96℃以上水浴处理10min的方法打开蛋白质的二三级结构，然后通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE电泳）按照分子量大小分离样本中的蛋白，电泳结束后将凝胶中的蛋白，转移到NC膜或PVDF膜上，为什么要转移到这两种膜上呢？那是因为NC膜和PVDF膜上面有无法用肉眼观察到的小孔，在蛋白转移到膜上的过程中，蛋白会进入并吸附在这些小孔上，转移结束后，使用封闭液，将没有蛋白结合的小孔用封闭液里的蛋白填满，防止后续在检测时，出现非特异性条带、杂带、高背景等情况，因为一抗结合到目标蛋白和小孔上很难被洗掉，在孵育一抗前，一定要选择合适目标蛋白的高特异性的抗体，然后带有荧光标记的二抗与一抗结合。最后就是凝胶成像仪检测观察目标蛋白在样本中的表达情况。

虽然Western Blot技术最常见的应用是检测样品中蛋白质的分子量大小和蛋白的数量，但是WB在其他方面的应用也很重要。如：检测蛋白质-蛋白质相互作用、检测蛋白质-DNA相互作用、蛋白-RNA相互作用等。

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