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KLH

BSA

OVA

血蓝蛋白，是在某些软体动物、节肢动物（蜘蛛和甲壳虫）的血淋巴中发现的一种游离的蓝色呼吸色素。血蓝蛋白含两个直接连接多肽链的铜离子，与含铁的血红蛋白类似，它易于氧结合，也易与氧解离，是已知的唯一可与氧可逆结合的铜蛋白，氧化时呈青绿色，还原时呈白色。其分子量450000～130000。由于KLH比BSA有更高的免疫原性，因而是最常被选用的载体蛋白

牛血清白蛋白（BSA）是一种来源于牛的血浆蛋白，分子量为7×10⁴Da（含有59个Lys），属于最稳定的和可溶的白蛋白。大约有30-35个主要氨基可用于与链接剂发生共轭反应，使得BSA成为一种很流行的弱抗原化合物载体蛋白。因为BSA比KLH小，所以它比KLH更易溶于水。

卵清蛋白（OVA）是蛋清中含量最丰富的蛋白质，其分子量为4.5×10⁴Da。它经常被用作第二载体蛋白，以确认抗体是特异性的肽，而不是载体蛋白，如牛血清白蛋白。

混合酸酐法

碳二亚胺法

混合酸酐法，也称氯甲酸异丁酯法。半抗原上的羧基在正丁胺存在下与氯甲酸异丁酯反应，形成混合酸酐的中间体，在与蛋白质的氨基反应，形成半抗原与蛋白质的结合物。

碳二亚胺（EDC）使羧基和氨基间脱水形成酰胺键，半抗原上的羧基先与EDC反应生成一个中间物，然后再与蛋白质上的氨基反应，形成半抗原与蛋白质的结合物。EDC被称作为零长度交联剂之一，因为它作为酰胺键的形成介质并没有形成手臂分子。此方法连接十分简便，只需将载体蛋白质和抗原按一定比例混合在适当的溶液中，然后加入水溶性碳化二亚胺，搅拌1-2h，置室温24h，再经透析即可。如果半抗原分子中不含羧基，可通过某些化学反应引入羧基。在引入羧基后，也可用上述方法进行偶联。

戊二醛法

重氮化法

双功能试剂戊二醛的两个醛基分别与半抗原和蛋白质上的氨基形成schiff键（-N=C＜），在半抗原和蛋白质间引入一个五碳桥。这一反应条件温和，可在4-40℃及pH6.0-8.0内进行，操作亦简便，因此应用广泛。戊二醛受到光照、温度和碱性的影响，可能发生自我聚合，减弱其交联作用，因此最好使用新鲜的戊二醛。

用于活性基团是芳香胺基的半抗原，芳香胺基与NaNO₂和HCl反应得到一个重氮盐，它可直接接到蛋白质酪氨酸羧基的邻位上，形成一个偶氮化合物。

琥珀酸酐法

羰基二咪唑法

半抗原的羟基与琥珀酸酐在无水吡啶中反应得到一个琥珀酸半酯（带有羧基的中间体），再经碳二亚胺法或混合酸酐法与蛋白质氨基结合，在半抗原与蛋白质载体间插入一个琥珀酰基。

N，N-羰基二咪唑是引入羰基的高活性试剂，在肽合成中首次表明了是形成极好的酰胺键试剂。含羧基的分子同羰基二咪唑反应，形成中间体咪唑基甲酸酯，它能和N-亲核试剂反应，得到N-烷基化的甲酸酯键，通常蛋白质通过N-端（α-氨基）和赖氨酸侧链的（e-氨基）和分子形成不带电的类似尿烷的衍生物，具有极好的化学稳定性。