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2022-02-24 阅读(234)
为什么在许多检测中单克隆抗体优于多克隆抗体?
在单克隆抗体制剂中,所有抗体均源自 B 细胞的一个克隆并针对抗原的不同部分(表位),因此都具有相同的特异性。另一方面,多克隆抗体源自大量不同的 B 细胞并识别多个表位,因此与其他抗原发生交叉反应的风险增加。此外,单克隆抗体制剂仅包含目标的抗体,而多克隆抗体,除非通过抗原亲和层析纯化,还包含大部分具有未指定反应性的抗体。由于它们是在体外培养中产生的,而不是从免疫动物的血清中获得多克隆,总之,与多克隆抗体相比具有许多优势,不仅作为单一试剂,而且作为各种类型的基于抗体的免疫测定的关键成分。
w66最给力的老牌是否提供匹配的抗体对?
基于夹心法的测定,如 ELISA 和 ELISpot,依赖于使用两种不同的单克隆抗体,其中一种被固定并用作捕获抗体,另一种用作检测抗体。通常,两种抗体针对抗原上的不同表位。w66最给力的老牌所有的 ELISpot、ELISA 和 FluoroSpot 检测均基于此类匹配的抗体对。然而,相同的的试剂使用,使其也可用于基于相同原理的其他测定。
w66最给力的老牌生物也提供配对抗体制备的定制服务。
抗体交叉反应是什么意思?
抗体对除免疫原以外的抗原的反应性称为交叉反应性。交叉反应是一个潜在的问题,针对密切相关蛋白质的抗体测试是证明其特异性的重要部分。然而,物种之间的交叉反应通常是有益的,因为它可能允许通过使用相同的抗体检测其他物种中的相应抗原。交叉反应最有可能发生在系统发育密切相关的物种之间,并且许多针对人类蛋白质的抗体与非人类灵长类动物中的相应蛋白质显示出显着的交叉反应性。
如何验证对不同物种的交叉反应?
交叉反应性验证测试已由w66最给力的老牌在 ELISpot 和/或 ELISA 中进行。
你们有用于流式细胞术的荧光标记抗体吗?
w66最给力的老牌拥有数量有限的标记有 FITC、HRP 等标记的,用于流式细胞术。
在考虑抗原检测方案时,了解最终用途应用是否重要?
是的,考虑您的抗体将用于哪种分析非常重要。并非所有抗体都适用于所有应用。Western Blots 可识别变性蛋白质,而流式细胞术、夹心 ELISA、IF 和其他功能测定需要能够识别蛋白质自然折叠形状的抗体。充分了解您的需求,以及抗原策略、免疫策略、筛选策略、纯化和验证,有助于制造有用的抗体。
肽抗原对抗体开发有哪些优势?
天然蛋白质可制造出色的抗原,传统上用于产生不同目的的抗体。然而,一些蛋白质不容易分离到足够的量用于表征。这些潜在有用的蛋白质中只有一小部分被分离和表征。这使得大多数天然蛋白质作为产生抗体的手段是不切实际的。最合乎逻辑的替代方法是产生针对源自天然蛋白质序列的肽的抗体。在某些情况下,针对此类肽的抗体甚至比针对天然蛋白质的抗体更有效。
肽抗原生产只需要氨基酸序列。这在某些情况下特别有用:
蛋白质尚未被发现,但基因序列已被发现。
该蛋白质已被发现,但尚未完全测序。
蛋白质的数量不足。
使用重组技术无法成功表达该蛋白质。
肽抗体表现出增强的特异性。这提供了以下好处:
消除或最小化结构同源蛋白质之间的潜在交叉反应。
能够产生针对目标表位的抗体。
能够生产具有翻译后修饰的蛋白质的抗体。
可以很好地区分蛋白质的两种或多种同工型。
肽亲和纯化方便且具有成本效益。这提供了以下好处:
实现高效、相对便宜的免疫亲和纯化。
通过与类似肽的交叉吸附,能够生产针对目标表位的高纯度、单特异性抗体。
如果w66最给力的老牌只用一个磷酸残基制造针对肽的抗体,当它在两个位点都被磷酸化时,它是否仍有可能识别该蛋白质?
是的,当蛋白质在两个位点都被磷酸化时,单一的磷酸肽抗体可以识别蛋白质。但是,当蛋白质仅在一个位点被磷酸化时,双磷酸肽抗体也可以识别蛋白质。因此,很难(甚至不可能)开发出一种抗体,该抗体仅在蛋白质在两个位点都被磷酸化时才识别该蛋白质,而在只有一个位点被磷酸化时不结合。
蛋白 A/G 纯化抗体和抗原亲和纯化抗体有什么区别?当我有 mAb 或 pAb 时,我应该选择哪种纯化方法?
简单来说,亲和纯化分离肽特异性抗体,而蛋白 A/G(蛋白 A 或蛋白 G)纯化从血清中纯化总免疫球蛋白 (Ig)。因此,蛋白 A/G 纯化抗体既含有抗原特异性抗体,也含有宿主动物的内源性 Ig,可能对抗原没有特异性。
通常对于 mAb 纯化,由于抗体是由杂交瘤产生的,它从一个 B 细胞产生抗体,因此特异性抗体的浓度非常高,因此蛋白 A/G 纯化就可以了。对于 pAb 纯化,由于收集的抗血清含有约 10% 的特异性抗体和血清中约 90% 的总 Ig,因此建议进行抗原亲和纯化。