w66最给力的老牌

1.纳米抗体的制备方法

也称为，它的开发与传统单克隆抗体通过杂交瘤制备的方法不同，它一般通过免疫羊驼、构建噬菌体文库并通过噬菌体展示来筛选出纳米抗体，再通过纳米抗体表达和纯化后进行与抗原是否结合的验证实验。

单域抗体普遍通过免疫羊驼获得，羊驼体内免疫系统自身的抗体成熟后，分离B淋巴细胞，提取RNA，反转录获取cDNA，以cDNA为底物PCR扩增获取多样化纳米抗体基因片段，然后将多样化纳米抗体基因片段连接到噬菌粒上，构建噬菌体库，并通过噬菌体展示筛选技术得到适合的抗体，对纳米抗体进行验证。整个流程主要包括羊驼免疫、、抗体筛选、表达纯化及验证。

图1：纳米抗体生成示意图

2.纳米抗体的制备流程

2.1 羊驼免疫流程

准备抗原、免疫羊驼、采血、血清分离、分离淋巴细胞。

2.2构建噬菌体流程：

RNA提取、反转录cDNA、扩增抗体片段、PCR扩增、克隆至噬菌体质粒、转化TG1、扩增和纯化噬菌体文库

图2：RNA抽提电泳图片

2.3抗体筛选鉴定流程：

包被免疫管、封闭、抗原和噬菌体孵育、清洗、洗脱、ELISA鉴定。

2.4抗体表达与功能验证

表达：构建哺乳表达体系进行抗体表达，w66最给力的老牌建立了完善的哺乳表达体系，包括但不限于FreeStyle 293-F cell line和Expi CHO-S等细胞系，配合w66最给力的老牌设计的高表达载体（含有全长的CMV启动子以及优化后的分泌信号肽序列）进行重组抗体表达与制备。

图3：Fc-VHH纳米抗体表达结果图片

纯化：纳米抗体过镍柱纯化。

亲和力测定：将纯化好的纳米抗体进行Biacore亲和力检测。