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1.牛单B细胞技术原理

是近年来新发展的一类快速制备单克隆抗体的技术，基于流式细胞分选技术进行单B细胞单抗制备，利用每个B细胞只含有一个功能性重链可变区DNA序列和一个轻链可变区DNA序列且只产生一种特异性抗体的特性，从动物的淋巴组织中收集B细胞，通过单克隆化技术从单个抗体分泌B细胞中扩增重链和轻链可变区基因，从而将收集到的B细胞扩增成单一来源的克隆群，然后选择抗体生产宿主，使其产生抗体。

牛单B细胞技术具体特异性强，批次间差异小等特点，由该方法制得的牛单克隆抗体是常用的单克隆抗体。目前，牛单B细胞技术制备的抗体在生物医学研究、诊断工具和治疗药物研发等方面有广泛应用。

图1：牛重组单克隆抗体制备

2. 牛单B细胞单抗制备流程

①、动物免疫、PBMC分离。选择牛作为实验动物，并通过注射目标抗原（通常是目标蛋白或多肽）来激发免疫反应，免疫牛4-5次，以此激活牛的免疫系统，导致B细胞产生抗体。然后进行ELISA效价测定、免疫牛外周血采集和PBMC分离。

②、流式分选。用PBMC流式分选方法来分选抗原特异性的单个B细胞。

③、单B细胞培养筛选。将分选的单个B细胞先在体外进行5~20板96孔板单B细胞培养，然后将细胞培养的上清进行ELISA筛选或者FACS等前期介入检测。

④、阳性克隆测序。挑选检测的至少20个阳性细胞克隆进行RT-PCR，来扩增其抗体可变区基因，然后进行测序。

⑤、载体构建、抗体表达纯化。最后进行抗体的哺乳表达载体构建、细胞转染和ELISA验证。

图2：牛单B细胞技术抗体制备流程图

3. 单B细胞单抗制备优势

单B细胞技术能够根据B细胞的特性快速制备单克隆抗体，直接获取完整的单一来源抗体，该方法不限种属、效率高、特异性高、抗体亲和力高、可成药性高、基因多样性好且具有全天然源性，并且能够直接获得抗体基因序列。

4. 牛单B细胞应用

牛单B细胞技术制备的抗体通常广泛应用于以下4个方面：

①药物研发。牛单B细胞技术制备的抗体能够被用于新药物的研发，尤其是在癌症治疗领域具有极大的应用前景。

②疫苗研制。牛单B细胞技术制备的抗体能够被用于提高疫苗的效力和特异性。

③免疫疗法。使用牛单B细胞技术制备的抗体可以用于免疫治疗，能够为消费者提供更加个性化的治疗。

④基础医学研究。抗体具有特异性和多样性，能够用于解析生物学过程和疾病机制。