1.天然蛋白纯化概念

蛋白质的分离纯化在生物化学研究应用中使用广泛，是一项重要的操作技术。一个典型的真核细胞可以包含数以千计的不同蛋白质，为了研究某一个蛋白质，必须首先将该蛋白质从其他蛋白质和非蛋白质分子中纯化出来。

w66最给力的老牌生物可以提供有进行纯化，同时也可以进行组织液，唾液，肠液，动物或者人的血清，甚至是一些动物组织等进行天然蛋白的纯化分离。

2.天然蛋白纯化方法

根据蛋白的特性，一般可以有以下5种纯化方法，亲和色谱、离子交换、分子筛、疏水色谱、HPLC，使用先进的AKTA纯化系统和多种规格的预装纯化柱来纯化不同来源的重组蛋白或天然蛋白。

图1：AKTA纯化仪

3.不同分子天然蛋白分离纯化

3.1天然大分子蛋白分离纯化

根据客户需要纯化的目的蛋白的理化性质，选用适当孔径的分子筛分离纯化，再根据样品缓冲液的PH值选用合适的阴、阳离子吸附柱以及HLPC，鉴定并收取相应洗脱峰。

3.2天然小分子蛋白分离纯化

先通过分子筛多层级分离过滤除去大分子杂质，再使用大孔树脂或反向树脂纯化小分子化合物，进一步通过HPLC和MS对小分子蛋白进行鉴定。

3.3混合未知蛋白样品分离纯化

根据客户需分离的目的蛋白特性制定相应的方案进行分离纯化，最后会通过质谱鉴定、活性鉴定等多种方案确认分离产物。

4.天然蛋白纯化步骤

天然蛋白分离纯化一般程序可以分为前处理、粗分离、细分离三步。

4.1前处理

分离纯化某种蛋白质，首先要把蛋白质从原来的组织或细胞中以溶解的状态释放出来并保持原来的天然状态，不丢失生物活性。因此，动物材料应先剔除结缔组织和脂肪组织，然后根据不同的情况，选择适当的方法，将组织和细胞破碎；植物组织和细胞由于具有纤维素、半纤维素和果胶等物质组成的细胞壁，一般需要用石英砂或玻璃粉和适当的提取液一起研磨的方法或用纤维素酶处理也能达到目的。

4.2粗分离

当蛋白质提取液（有时还杂有核酸、多糖之类）获得后，一般使用用盐析、等电点沉淀和有机溶剂分级分离等方法。这些方法的特点是简便、处理量大，既能除去大量杂质，又能浓缩蛋白溶液。

4.3细分离

一般蛋白经过粗分离后，体积较小，大部分杂质蛋白已经被除去。使用疏水层析、离子交换层析、分子筛分离以及以及亲和层析等方法进行进一步细分离。

4.3.1纯化前检测与纯化小试

首先进行SDS-PAGE检测蛋白情况，后通过摸索条件（缓冲液、填料、洗脱条件、盐梯度等条件），制定出离子交换层析方案。

（1）菌液经过离心过滤，使用Akta purifier仪器，配合G25脱盐柱进行上样洗脱，达到纯化的目的。

图2：脱盐后样品纯化图谱

图3：脱盐后样品SDS-PAGE图

（2）G25脱盐后的样品进行SPFF(琼脂糖凝胶)层析柱分离，样品离心过膜后，经过平衡，上样，洗脱步骤纯化。

图4：SPFF分离纯化图谱

图5：SPFF纯化样品SDS-PAGE图

4.3.2蛋白纯化及检测

蛋白纯化小试条件摸索完成后，可以根据小试条件放大进行大量纯化，SDS-PAGE（纯度验证），紫外吸收、BCA法等进行浓度检测。

5.交付

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