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噬菌体抗体库的分类
目前为止,研究者已经创建了大量的、各式各样的抗体库,大体可以分为四类: 天然抗体库、免疫库、半合成抗体库以及人工合成库。天然抗体库来自未经特定抗原免疫的宿主。理论上从天然抗体库中可以筛选获得可特异结合任何抗原的抗体,但由于这些抗体基因缺乏体内重排与突变,因而获得高亲和力的抗体相对不易,所筛选的抗体需要进行进一步的亲和力成熟改造;并且筛选背景高,特定抗原的抗体丰度低。
与天然抗体库不同,通过采用来源于特定抗原有效免疫的之后的宿主B细胞构建的免疫抗体库,含有大量针对该特定抗原的抗体,筛选背景大大降低; 并且这些抗体基因经过宿主体内的亲和力成熟过程,往往具有令人满意的亲和力。通常采用一个库容为1x10^6克隆的免疫抗体库,w66最给力的老牌就可以获得抗体亲和力常数低于1x10^-9mol/L较高亲和力的抗体。虽然从一个经过良好抗原免疫构建的噬菌体抗体库中很容易获得适宜的全人源抗体,但由于人体不能随便免疫,制备全人源抗体时往往受到限制,这就要求任然需要建立库容量比较大的非免疫库,从中筛选目的全人源抗体。抗体库往往需要达到1x10^12克隆才能保证从中筛选到针对特定抗原表位的具有较高亲和力的全人源抗体。
此外基于天然抗体库的框架区以及CDR1和CDR2区,通过随机合成扩增CDR3区的DNA序列,能够获得半合成抗体库。由于CDR3是决定抗体特异性的最重要部位,在B细胞个体发生过程中,结构及序列的多样性变化最大,所以最常见是在CDR3引入随机突变,同时考虑长度的变化。但引入随机突变的时候,要兼顾CDR3侧翼的相对保守性,保留某些在抗原接触和结构形成中有重要作用的残基。人工合成库则是通过抗体基因信息设计并合成的纯人工合成库。
噬菌体抗体库的原理及优缺点
类型 |
天然抗体库 |
免疫库 |
半合成抗体库 |
人工合成库 |
原理 |
天然抗体库是通过从未经免疫的动物中采集B细胞,利用噬菌体展示技术构建的。这些库反映了宿主的天然免疫多样性。 |
免疫库是从经过特定抗原免疫的动物中收集B细胞构建的。这种方法能够产生针对特定抗原的高亲和力抗体。 |
半合成抗体库通过在天然抗体库的框架区内插入随机或半随机的互补决定区(CDR)序列来构建,旨在增强库的多样性。 |
人工合成库完全基于计算机设计和合成,不依赖于自然存在的抗体序列。通过设计具有广泛多样性的CDR区域来实现。 |
优点 |
包含广泛的抗体多样性,能够捕获自然免疫系统的全貌。 |
高特异性和高亲和力,适合针对已知抗原的抗体开发。 |
结合了天然抗体库的优点和通过人工手段增加的多样性,提高了发现新抗体的概率。 |
极高的多样性,理论上可以针对任何抗原产生抗体,不受自然抗体序列的限制。 |
缺点 |
由于未经过特定抗原免疫,特异性高的抗体可能较少。 |
抗体多样性较天然抗体库有限,且需要已知的抗原进行免疫。 |
虽然多样性增加,但对特定抗体的优化可能需要更多时间和资源。 |
由于缺乏天然免疫选择过程,可能需要更多的筛选工作来识别高亲和力和高特异性的抗体。 |
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