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生物偶联简单来讲是包含一个分子常通过共价键附着到另一个分子上以产生一个由两分子连接在一起的复合物。生物偶联技术在关于特定靶向衍生化的蛋白质、DNA、RNA及碳水化合物等新型研究的开发,例如配体的发现,疾病诊断,高效筛选等方向具有广泛应用,是一个拥有广阔前景的研究领域。
生物偶联技术概述:
生物偶联是两个生物分子共价结合的过程,常见生物化学偶联包括赖氨酸的氨基酸残基的胺偶联,半胱氨酸残基的巯基偶联,和经常发生的光化学引发的自由基反应。生物偶联的产物是一种生物共轭物。
最常见的生物偶联是小分子的偶联,如生物素连接到蛋白质;蛋白质与蛋白质的连接,如抗体与酶的偶联。其它不常见的偶联分子如寡糖,核酸,合成的聚合物:聚乙二醇,碳纳米管。生物偶联药物包括抗体-药物复合体(ADC)、聚乙二醇化蛋白质、siRNA 复合物和疫苗复合物等类型。
图1 偶联原理图
小分子半抗原载体偶联:
小分子属于半抗原,只有反应原性,但不具有免疫原性,只有与载体(通常为蛋白质,也有多肽)偶连后形成完全抗原,才具有免疫原性,进入动物体内后才会产生抗体。载体蛋白是一种自身就能引发免疫反应的大分子,许多不同种类的载体蛋白与小分子偶联后可制备成完全的抗原。常用的载体包括牛血清白蛋白、钥孔血蓝蛋白、卵清蛋白、牛甲状腺球蛋白等。对于载体蛋白的选择,主要涉及其溶解性、大小、偶联基团、免疫原性、成本价格等因素。目前市面上应用最为广泛的是牛血清白蛋白BSA,主要是由于BSA化学性质稳定,不易变性,分子内含有多种氨基,且赖氨酸含量高,廉价易得。但BSA由于在一些免疫检测实验中作为阻断剂而限制了它的使用。其次选择较多的是钥孔血蓝蛋白KLH以及卵清蛋白OVA。
小分子半抗原与载体偶联方法:
1,带羧基或者氨基类的化合物,用碳化二亚胺法以及混合酸酐法;
2,含巯基类的化合物,用马来酰亚胺法;
3,分子结构中带有氨基类的化合物,戊二醛法,最为常用的一种方法。
生物偶联的应用:
1.生物化学评估:
偶联的小分子可以作为探针进行严格的生化分析,非荧光小分子例如生物素等也可作为机械探针。
2. 诊断应用:
临床样品的定性定量分析对于早期疾病的诊断是至关重要的,抗体-抗原相互作用的高特异性避免了样品纯化,且可广泛应用。
3. 工业应用:
生物偶联可在多个行业里应用,可在食品工业中应用,如异构化延胡索酸和苹果酸,进行食品残留检测;制药行业采用固定化酶做药物的合成,还可进行毒品检测,兴奋剂检测等。
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