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2024-02-27 阅读(239)
1.鼠单B细胞技术原理
是近年来新发展的一类快速制备单克隆抗体的技术,基于流式细胞分选技术进行单B细胞单抗制备,利用每个B细胞只含有一个功能性重链可变区DNA序列和一个轻链可变区DNA序列且只产生一种特异性抗体的特性,从动物的淋巴组织中收集B细胞,通过单克隆化技术从单个抗体分泌B细胞中扩增重链和轻链可变区基因,从而将收集到的B细胞扩增成单一来源的克隆群,然后选择抗体生产宿主,使其产生抗体。具体特异性强,批次间差异小等特点,由该方法制得的是常用的单克隆抗体。目前,鼠单B细胞技术制备的抗体在生物医学研究、诊断工具和治疗药物研发等方面有广泛应用。
图1:小鼠重组单克隆抗体制备
2. 鼠单B细胞单抗制备流程
①动物免疫、PBMC分离。选择小鼠作为实验动物,并通过注射目标抗原(通常是目标蛋白或多肽)来激发免疫反应,免疫小鼠4-5次,以此激活小鼠的免疫系统,导致B细胞产生抗体。然后进行ELISA效价测定、免疫小鼠外周血采集和PBMC分离。
②流式分选。用PBMC流式分选方法来分选抗原特异性的单个B细胞。
③单B细胞培养筛选。将分选的单个B细胞先在体外进行5~20板96孔板单B细胞培养,然后将细胞培养的上清进行ELISA筛选或者FACS等前期介入检测。
④阳性克隆测序。挑选检测的至少20个阳性细胞克隆进行RT-PCR,来扩增其抗体可变区基因,然后进行测序。
⑤载体构建、抗体表达纯化。最后进行抗体的哺乳表达载体构建、细胞转染和ELISA验证。
图2:鼠单B细胞技术抗体制备流程图
3. 单B细胞单抗制备优势
类目 |
单B细胞技术 |
杂交瘤技术 |
噬菌体展示技术 |
抗体 |
天然 |
天然 |
非天然 |
抗体亲和力 |
高 |
高 |
中等 |
可成药性 |
高 |
高 |
低 |
时间 |
16~20周,可选快速免疫 |
20~26周,可选快速免疫 |
16~20周,可选快速免疫 |
抗体基因序列 |
直接获得 |
需要进一步测序 |
直接获得 |
抗体多样性 |
高 |
中等 |
中等 |
所能筛选的种属 |
不限种属 |
鼠、兔 |
不限种属 |
单B细胞技术能够根据B细胞的特性快速制备单克隆抗体,直接获取完整的单一来源抗体,该方法不限种属、效率高、特异性高、抗体亲和力高、可成药性高、基因多样性好且具有全天然源性,并且能够直接获得抗体基因序列。
4. 鼠单B细胞应用
鼠单B细胞技术制备的抗体通常广泛应用于以下4个方面:
①药物研发。鼠单B细胞技术制备的抗体能够被用于新药物的研发,尤其是在癌症治疗领域具有极大的应用前景。
②疫苗研制。鼠单B细胞技术制备的抗体能够被用于提高疫苗的效力和特异性。
③免疫疗法。使用鼠单B细胞技术制备的抗体可以用于免疫治疗,能够为消费者提供更加个性化的治疗。
④基础医学研究。抗体具有特异性和多样性,能够用于解析生物学过程和疾病机制。
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