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在制备的过程中，可能会遇到一些常见问题，以下是一些可能的问题和相应的解决方法：

1. 兔单抗的特异性不足是什么导致的？

答：

抗体如果发生了与非目标蛋白的结合，那么可能导致抗体的特异性不足。发生这种情况可以重新评估抗原选择，优化抗原的纯度和质量，调整免疫方案以提高特异性。

2. 用流式可以一次分选多少个抗原特异性的单个B细胞？

答：

目前，FACS法的通量是一天可以分选10板抗原特异性的单B细胞

3. 抗体的产量低该怎么办？

答：

如出现抗体产量低的情况，可以调整免疫方案，适当增加免疫次数，也可以使用强化的免疫佐剂。

4. 抗体亲和力低怎么办？

答：

如出现抗体亲和力低的情况，可以调整免疫方案，重新评估抗原选择，也可以通过亲和纯化步骤来提高亲和力

5. FACS分选单B细胞，除特异性抗原标记外，还需要其他什么surface marker染色？

答：

小鼠B细胞可以用CD19作为表面marker，然后通过IgG阳性，IgM阴性来分选单细胞。兔子B细胞的表面marker目前信息比较少，分选的时候可以先根据物理参数，比如大小、颗粒度进行分选，然后再根据IgG阳性IgM阴性以及抗原特异性上进行分选。

6. 培养的记忆B细胞可以分泌抗体吗？需要先增殖后分化成浆细胞吗？

答：

是的，记忆B细胞需要分化成终端的浆细胞，才能分泌抗体。

7. 用单个B细胞技术制备抗体，记忆B细胞和浆细胞哪种细胞更有优势？

答：

两种细胞各有优势，记忆B细胞抗体基因拷贝数较低但在B细胞中的比例比浆细胞高。浆细胞在B细胞中的比例很低，但每个细胞含有抗体基因的拷贝数相对较高。