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1. 制备羊驼单B细胞单抗，对客户提供的样品有什么要求？

答：

重组蛋白：≥2.5 mg，要求蛋白纯度>85%，蛋白要求分子量大于10 kDa，可溶性蛋白浓度在0.5~5mg/mL之间。若要求抗原亲和纯化，需额外提供10 mg左右重组蛋白。

多肽与小分子：裸肽≥10 mg，多肽纯度>90%，不少于10个AA，偶联KLH/BSA/OVA或其他载体蛋白；小分子需要预先对结构进行评估。

细菌和病毒样品：是否对人致病；灭活方式；灭活前后SDS PAGE检测图，清楚标示样品上样量，Marker上样量，以及各自的浓度。

2. 单个B细胞筛选后，抗体是如何组装的，如何设计它的重链和轻链引物？

答：

分别从单个B细胞中扩出抗体的重轻链基因，共表达转染细胞。引物可以通过germline基因序列来设计。

3. 羊驼单B细胞单抗制备服务的服务内容主要包括哪些？

答：

（1）半抗原改造/完全抗原制备。

（2）抗原乳化，免疫羊驼4-5次；ELISA效价测定；抗血清采集。

（3）PBMC分离；FACS Assay、ELISA Assay。

（4）RT-PCR；高通量测序。

（5）抗体小规模转染或放大。

4. 羊驼单B细胞单抗制备服务交付的材料有哪些？

答：

（1）改造产物及鉴定结果。

（2）免疫血清；ELISA检测结果；实验记录。

（3）高通量筛选结果报告，保证序列多样性的FACS binder；ELISA检测结果报告，阳性克隆株。

（4）测序原始数据；特异性序列。

（5）表达质粒，纯化抗体。

5. 单克隆细胞稳定性差如何解决？

答：

定期检测单克隆细胞的稳定性，选择稳定的单克隆细胞进行扩增和抗体生产。

6. B细胞大概培养多久可以用于ELISA检测，抗体量会达到多少？

答：

B细胞培养10-12天可用于ELISA检测，抗体量在0.2 μg/mL ~ >10 μg/mL。

7. 单个B细胞技术会成为治疗性抗体开发的金标准吗？

答：

虽然单个B细胞技术逐渐成为抗体开发的主流技术之一，但是抗体开发的技术路线仍然有很多种，如杂交瘤和噬菌体展示等，这些方法各有优缺点，相互之间是互补关系。

8. 单个B细胞直接裂解后与培养后的PCR成功率哪个更高？

答：

单个B细胞培养后的PCR成功率更高。培养后的B细胞经过扩增，细胞数增加，模板量更高。