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糖基化主要是指将聚糖附着在蛋白质、脂质或其他有机分子上的酶促过程。它是比较常见的蛋白质翻译后修饰（PTM）。由于附着聚糖的复杂性和同量异位性质，糖基化分析具有挑战性。随着单克隆抗体、糖蛋白、激素、细胞因子和凝血因子等蛋白质治疗药物在临床实践中的应用越来越多，常规监测蛋白质的N-糖基化越来越受欢迎。
N-聚糖是具有 Man3-GlcNAc2 核心的异质天线寡糖结构。它们通过末端 N-乙酰氨基葡萄糖 (GlcNAc) 和天冬酰胺的 NH 2基团之间的糖苷键连接到多肽链。这组互补分析的目的是阐明目标分子（如蛋白质或肽）的整体 N-聚糖谱。大多数 N-聚糖样品制备包括一般步骤，包括糖蛋白的消化、去糖基化、纯化、标记/衍生化和 SPE。根据样品的性质，也可以使用额外的步骤和技术选项。
图1 N-聚糖分析的一般工作流程
基于 MALDI TOF MS 和 UHPLC 的技术可确定与纯化的目标分子或分子混合物相关的整体 N-聚糖群。
MALDI-TOF MS 的 N-聚糖分析：
定性基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱 (MALDI-TOF MS) 代表了糖基化化合物结构表征的高灵敏度和稳健性，也可以以高通量方式使用。单电荷离子形成保持 MALDI 能力，而不是电喷雾电离分析 N-聚糖混合物。在全甲基化后分析使用肽 N-糖苷酶 A 或 F 通过酶促去糖基化释放的 N-聚糖。
HILIC-UHPLC MS 的 N-糖分析：
亲水相互作用色谱 (HILIC) 一直是 N-聚糖分析的强大技术。因此，由于其被广泛接受，使用 PNGase F 对酶促聚糖释放进行糖谱分析，然后通过 HILIC-UHPLC 使用 2-氨基苯甲酰胺 (2-AB) 进行衍生化是一种快速且稳健的技术，可用于分析大量含有众所周知的 N-聚糖的样品配置文件。在荧光标记之前，当存在大量可能干扰衍生反应的去污剂、非挥发性盐或具有游离氨基的材料时，应在 TSK Amide-80 柱上进一步纯化收获的 N-聚糖。然后通过 HILIC 分离组合质谱检测分析标记的 N-聚糖。
客户提供：
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蛋白质 |
至少100ug |
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细胞 |
至少1×107个 |
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动物组织 |
至少1g |
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植物组织 |
至少200mg |
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抗凝血 (EDTA) |
至少1ml |
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血清 |
血清0.2-0.5ml |
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尿液 |
至少2ml |
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微生物样品 |
干重不低于200mg |
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