w66最给力的老牌生物科技（天津）有限公司
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w66最给力的老牌生物（KMD Bioscience）多年来致力于蛋白表达与测序研究，可以为客户提高高品质的蛋白DeNovo测序服务。蛋白氨基酸序列分析是蛋白质研究的基础和关键。通过蛋白质DeNovo测序获得的信息，拥有许多有价值的用途，如能够用于蛋白质的鉴定，分子克隆的探针的设计，还可用作免疫原的肽段合成等。基于高分辨率质谱和高保真基因克隆技术，w66最给力的老牌能够为客户提供高保真的抗体和蛋白测序服务。
w66最给力的老牌生物拥有技能娴熟的实验技术人员，积累了丰富的蛋白测序和抗体测序经验，能够提供基于质谱的蛋白DeNovo测序分析服务。结合基因测序和生物信息学数据库，w66最给力的老牌建立了成熟的蛋白，抗体测序平台，可实现对蛋白一级结构快速准确的分析，也可以提供蛋白质N端测序服务。
蛋白De Novo测序服务：
蛋白质序列即氨基酸排列顺序是蛋白质重要的理化性质，对蛋白质种类鉴定以及高级结构预测等具有重要意义。随着生命科学技术的发展进步，先后涌现出了诸多蛋白质测序技术，可以大致将其分为质谱法和非质谱法，非质谱法主要包括Sanger法、Edman降解法、二硝基氟苯法、丹磺酰氯法、肼解法以及羧肽酶法等，其中Edman降解法是最常用的非质谱法。
质谱法和Edman降解法都可以用于蛋白质序列分析，但是二者在分析原理和可以测定的序列区域上具有很大的差别。Edman降解法属于化学方法，是一种针对N末端氨基酸的测序方法，并不需要依赖蛋白数据库便可直接进行数据分析，直接得到氨基酸序列。其通过三个连续的化学反应可以切下一个N末端氨基酸残基，并对该氨基酸进行鉴定，然后将少了一个氨基酸的蛋白质再次进行以上操作，如此循环，每次循环鉴定一个氨基酸残基。但是，末端修饰或封闭的氨基酸不能进行上述化学反应，因此，Edman降解法对N末端修饰或封闭的蛋白质无能为力。Edman测序质量随着检测氨基酸的数量上升而下降，所以通常只用于确定前30-60个氨基酸，其检测长度最多不超过100个氨基酸。因此，Edman测序不能用于进行蛋白全长测序。
质谱法将蛋白消化成5-25个氨基酸的肽，随即通过质谱仪分析检测，将采集的数据与理论序列数据库进行匹配，进而确认N端序列。质谱可以测出封闭和修饰的蛋白质N末端，已成为首选的全长抗体测序方法。相比Edman降解法，质谱法可以实现蛋白质的全长序列分析，还可以用于N末端发生修饰的蛋白质序列分析，打破了Edman降解法的局限性。此外，质谱法还可以进行从头测序，为测定全新的或者没有理论数据库的蛋白质序列提供了解决方法。
w66最给力的老牌生物具备优质的Orbitrap Fusion Lumos质谱仪，建立了完善的数据库结合法测序服务，能够为广大客户提供高品质的蛋白质全序列测序服务。鉴于不同的实验需求，我司也为广大科研人员提供Edman降解法测定蛋白N端多达67个氨基酸序列长度。
基于Orbitrap Fusion Lumos质谱仪与Edman降解互补的全蛋白从头测序：
客户将蛋白产品寄送至w66最给力的老牌生物后，w66最给力的老牌生物会先对蛋白样品进行鉴定和片段化处理，w66最给力的老牌会选用常用的6种蛋白酶包括Trypsin、Chymotrypsin、Asp-N、Glu-C、Lys-C和Lys-，以尽可能得到种类繁多的片段化序列，实现全部蛋白序列覆盖。多肽质谱测序后的序列信息经过PEAKs Studio（蛋白产品）和PEAKs Ab（抗体产品）软件拼接，并加以人工辅助实现正确拼接的蛋白或抗体一级序列。更多信息关于从头氨基酸序列测序，请查阅抗体从头测序服务。
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图1 Orbitrap Fusion Lumos质谱仪
Orbitrap Fusion Lumos质谱仪是一台三合一组合型质谱仪，该仪器配置了全新的大气压离子源、先进的四极杆技术、超高场Orbitrap分析器和最新型的双压线性离子阱，是目前比较先进的质谱仪。Orbitrap Fusion Lumos旨在通过先进的性能扩大蛋白质组学、生物制药和代谢组学的应用，包括应用同位素标记定量、低水平P分析、数据非依赖采集（DIA）和自上而下的蛋白质组学研究。由于其卓越的性能和先进的配置可应用于多方面，如高通量蛋白鉴定、大规模蛋白质组学非标记定量分析、蛋白翻译后修饰PTMs分析（如乙酰化、泛素化、磷酸化、糖基化等）以及蛋白质top-down分析等。
Orbitrap Fusion Lumos的特点：
-- 新型高灵敏度API接口将高容量离子传输管和电动离子漏斗结合，以提高离子流，降低检测限
-- 先进的主动离子束传输组件可防止中性粒子和高速离子簇进入分离离子的四极杆中
-- 先进的四极杆技术结合高灵敏度和离子传输效率，使选中离子从分离窗口中心穿过
-- 先进的真空技术提高了向Orbitrap分析仪传输高分子量离子的速度
-- 全新的ETD HD—高动态范围ETD显著提升了碎片离子覆盖度
-- 高级峰值测定（APD）大幅增加了特征肽段的识别数量和分析通量
-- MS和MSn的同步离子选择（SPS）实验不仅显著提高识别的多肽和蛋白质数量，还能提高定量分析的准确性
-- 通用方法适用于大部分肽段鉴定，无需针对浓度未知的样品进行方法优化，从而降低了常规肽段鉴定实验中样品和仪器对时间的要求
-- 直观、灵活的拖放式用户界面简化了方法开发，可实现独特而复杂的工作流程
样品要求：
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服务项目 |
样本类型 |
样本状态 |
标准样本量 |
纯度要求 |
备注 |
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蛋白或抗体全长测序 |
单克隆抗体、抗体偶联药物、重组蛋白、多肽药 |
液体/干粉/胶条 |
≥100ug |
≥90% |
1、样品中尽量不含有BSA，如果有BSA需在缓冲液中组成一栏备注详细浓度； 2、重组蛋白样品需提供SDS-PAGE结果图片，提供是否二聚或多聚信息； 3、N端测序以及肽图分析需要提供参考序列； 4、(胶条)胶条样品每个孔上样品量至少15微克，每个样品送样至少6个胶孔，4℃保存， 放入EP管中，加入去离子水浸泡，冰袋或干冰寄送； 5、(溶液)蛋白溶解缓冲液可以使用纯水或PBS buffer，如有其他的溶液成分请在样本信息中注明。制备好的样品，-20℃保存，放入EP管中，冰袋或干冰寄送； 6、(干粉)蛋白干粉是由纯水或者PBS buffer冻干获得的，含有其他溶液成分请在样本信息中注明。制备好的样品，放入EP管中，常温或冰袋寄送； 7、送样前需预先沟通； |
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肽段覆盖率分析 |
单克隆抗体、抗体偶联药物、重组蛋白、多肽药 |
液体/干粉/胶条 |
≥100ug |
≥90% |
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N端氨基酸序列分析 |
单克隆抗体、抗体偶联药物、重组蛋白、多肽药 |
液体/干粉/胶条 |
≥100ug |
≥90% |
服务优势：
-- 蛋白测序服务保证
w66最给力的老牌生物的测序服务执行严格的质量控制，采用宽进窄出的原则，在不遗漏有效数据信息的同时实现了蛋白序列的准确鉴定。目前w66最给力的老牌实验室使用的Orbitrap Fusion Lumos质谱仪，相比于上一代Orbitrap Elite质谱仪，Lumos在提高了一级二级质谱扫描速度的同时保证肽段分子量的准确性。同时结合w66最给力的老牌序列拼接逻辑算法和商品化软件的处理能力（基于PEAKS软件分析），w66最给力的老牌能够区分分子量接近的氨基酸，如实现分子量差异在0.03Da的谷氨酰胺和赖氨酸差别分析。
-- 蛋白测序服务保证全序列覆盖
w66最给力的老牌生物针对不同的项目需求，会采用多达6种不同的蛋白酶对目标蛋白进行消化酶切，对单个氨基酸生成至少10次的片段，利用PEAKs Studio和PEAKs Ab软件自动实现不同轻重链酶切肽段之间全序列拼接；同时利用人工和数据库进行双重验证。
-- 经验丰富的修饰分析能力
w66最给力的老牌的抗体测序平台能够区分同源氨基酸的不同变异体，通过二级碎裂片段的特征峰即可实现亮氨酸和异亮氨酸的准确判定。对于转录后修饰的氨基酸分子，w66最给力的老牌的系统也能区分。
如何订购？
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