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w66最给力的老牌生物（KMD Bioscience）提供的噬菌体展示平台是一种超高通量配体筛选平台。噬菌体展示平台最多可构建1013个/ml的多肽或抗体克隆在噬菌体上展示。基于噬菌体展示平台，可为客户构建7肽库、12肽库、环7肽库等。
噬菌体展示文库筛选是一种体外筛选技术。它可以在噬菌体颗粒的外部显示一系列多肽或蛋白质文库，而编码这些蛋白质的DNA位于病毒颗粒内部。利用所展示的蛋白质与其编码的DNA之间的联系，w66最给力的老牌可以通过一种简单的体外筛选方法（称为“生物筛选”和配体）快速筛选出给定靶分子（抗体、酶、细胞表面受体等）的亲和多肽。最简单的冲洗方法是将靶分子固定在板或珠上，孵育一个显示不同肽的噬菌体文库，先洗掉未结合的噬菌体，然后洗脱特异性结合的噬菌体。扩增洗脱的噬菌体。重复上述结合扩增过程，以富集纯化与目标分子结合的多肽序列的噬菌体。筛选3-4轮后，每个克隆通过DNA测序、蓝白斑或ELISA等进行鉴定。
噬菌体展示7肽库的构建：
7文库是以A-X7-GGGS的形式显示线性七肽（X为任意规范氨基酸）。文库的特点是显示不同格式的随机肽序列融合到噬菌体次要外壳蛋白pIII的N端。在显示的肽和噬菌体的成熟pIII之间存在一个四氨基酸连接序列(Gly-Gly-Gly-Ser)。
利用客户提供的目标分子，从整个预制的噬菌体随机7肽文库中经过筛选、扩增和富集步骤，获得能与目标分子高亲和力结合的噬菌体克隆。通过测定该噬菌体的DNA序列，就可以知道该噬菌体所携带肽的氨基酸序列。
噬菌体肽库建库筛库流程：
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项目内容 |
服务内容 |
周期 |
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7肽基因库的合成 |
化学随机合成环7聚肽寡核苷酸片段。 |
3-5周 |
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7肽文库构建服 |
噬粒构建与转化：目的基因同源重组拼接pMECS载体，转化宿主菌TGI，构建M13噬菌体展示7肽文库。 |
4-6周 |
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7肽文库筛选服务 |
3轮筛选（如有特殊情况，则由w66最给力的老牌生物决定是否增加筛选轮次，无需额外费用）； 挑取50-80个蓝斑克隆进行序列测定。 |
4-5周 |
常用于肽库筛选的靶分子：
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分子类型 |
简介 |
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膜受体胞外结构域 |
在文库筛选的体外环境中使用分离的全膜受体作为靶标是有难度的，因为膜受体具有极强的疏水性，仅在脂质双层环境中保持其天然折叠。膜受体通常具有大的多结构域胞外区域，这些区域可能与不同的肽序列相互作用。受体的分离的配体结合结构域是集中选择模拟内源性配体的肽的极好的替代靶点。靶向较短的受体片段也可以提高对高度保守的受体家族的特定成员的特异性。另一方面，与特定受体结构域相对应的合成肽可能采用与天然蛋白质不同的构象，因此所选肽可能无法在其自然环境中识别受体。因此有必要首先针对合成肽筛选噬菌体文库，然后对所得富集文库进行亲和选择，以结合天然蛋白。 |
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针对内源性结合伴侣的中和抗体 |
针对内源性配体的中和抗体可以作为鉴定生物活性肽的替代靶标。抗体的抗原结合区模仿受体的配体结合位点，从而为回收与受体交叉反应的肽提供了“模具”。中和抗体不一定能识别位于配体上的确切受体结合表位，但可能通过与这些区域附近的位点结合来立体阻断配体-受体相互作用，从而发挥其拮抗作用。 |
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全细胞筛选 |
噬菌体文库也可以针对表达感兴趣的膜受体的活细胞进行筛选。这消除了对靶蛋白错误折叠的担忧，并允许针对其天然构象的受体的细胞外区域进行选择。靶向细胞可以是悬浮或者贴壁的。主要目标是寻找与肿瘤特异性受体结合的肽，这些肽可用于药物或诊断试剂的靶向递送。 |
噬菌体展示技术未来前景：
通过筛选噬菌体展示的随机肽文库开发的两种药物是聚乙二醇化促红细胞生成素受体激动剂聚乙二醇苷肽(Hematide, Affymax)和Fc融合的血小板生成素受体激动剂romiplostim (Nplate, Amgen)。另外两种药物，抗TNF-α抗体阿达木单抗（adalimumab）和血浆蛋白酶激肽肽（kallikrein）的小蛋白抑制剂ecallantide，已经利用噬菌体展示技术开发出来，使该技术与药物发现领域的其他成熟方法并立。
w66最给力的老牌服务优势：
--可溶抗原的快速制备能力：结合公司现有的重组蛋白表达体系，能够在短时间内制备出高纯度、高生物学活性的可溶抗原蛋白，用以支持噬菌体抗体的免疫及筛选工作。
--成熟稳定的免疫文库构建技术：目前w66最给力的老牌获得的噬菌体一级免疫文库的库容可达108-109，其序列丰度>99%，保证直接筛选获得的抗体亲和力达到uM甚至nM级别。
--具备多种筛选体系，包括直接筛选法、竞争法、负筛选法、细胞筛选法等。
--多种预制肽库可选，如：7肽库、环7肽库、12肽库等。
--可提供多肽个性化定制服务及筛选服务。
--多种筛选抗原的筛选可供选择，如：蛋白、多肽、细胞系、原代细胞等。
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