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w66最给力的老牌生物（KMD Bioscience）提供的噬菌体展示平台是一种超高通量配体筛选平台。噬菌体展示平台最多可构建1013个/ml的多肽或抗体克隆在噬菌体上展示。基于噬菌体展示平台，可为客户构建7肽库、12肽库、环7肽库等。
环化修饰可以赋予多肽一些优势，使其累积起来更像药物。环肽通常对蛋白酶具有更强的抗性，并且能够更好地穿透细胞。通过环化来限制肽是模拟蛋白质二级结构（例如肽环）或创建与其线性类似物相比具有增强构象稳定性的肽的常用策略。KMD Bioscience构建了预制C7C噬菌体展示肽文库，旨在构建高质量的肽环化文库。
噬菌体展示环7肽库的构建：
C7C文库的随机片段两侧有一对半胱氨酸残基，它们在噬菌体组装过程中被氧化成二硫键，导致所显示的肽以环的形式呈现给靶标。每个库都具有109个独立克隆的复杂性，这足以编码大多数可能的7-Mer (1.28 x 109)肽序列，但仅占约4.1 x 1015个12-mer序列的一小部分(不到百万分之一)。因此，通常认为12库具有与7库相同的多样性，但分布在12个残基上。在7和12文库中，肽-pIII融合的N端第一个残基是第一个随机位置。在C7C文库中的随机位置在N端前面是Ala-Cys。所有库都包含一个短连接显示肽和pIII外壳蛋白之间的序列(Gly-Gly-Gly-Ser)。
噬菌体展示环7肽库的筛选：
噬菌体肽库筛选总的指导思想是利用有些生物大分子之间存在着不同大小的亲和力，以生物大分子为靶目标，通过直接或多轮筛选可以从肽库中筛选得到相应的且具有特定亲和力的结合肽。噬菌体肽库筛选方法一般采用生物学筛选技术，又称为生物淘洗(biopanning)，即利用生物操作方法从噬菌体随机肽库中筛选出所需的噬菌体肽。筛选方法可以因筛选靶目标的性质、筛选的规模而不同，并且与操作人员的习惯有关。文库筛选的主要步骤为：
1. 选择噬菌体靶标捕获法：用靶包覆和阻断法制备捕获表面，或选择亲和磁珠法。2.将噬菌体文库与目标物孵育。3.用TBST洗涤未结合的噬菌体，释放具有低pH缓冲液或已知配体的结合噬菌体到目标。4.将选择的噬菌体洗脱液放大培养。在培养上清中加入PEG/2.5 M NaCl浓缩噬菌体。5.滴定未扩增的洗脱液以及富集的噬菌体池，以确定第二轮选择的输入量。根据需要增加选择或洗涤强度。6.三轮筛选后，不要放大洗脱。相反，滴度第三轮洗脱获得单个斑块进行噬菌体测序反应。7.筛选后分析：确定序列基序和/或与选定的克隆进行结合研究。
噬菌体肽库建库筛库流程：
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项目内容 |
服务内容 |
周期 |
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环7肽基因库的合成 |
化学随机合成环状7聚肽寡核苷酸片段。 |
3-5周 |
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环7肽文库构建服 |
噬粒构建与转化：目的基因同源重组拼接pMECS载体，转化宿主菌TGI，构建M13噬菌体展示环7肽文库。 |
4-6周 |
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环7肽文库筛选服务 |
3轮筛选（如有特殊情况，则由w66最给力的老牌生物决定是否增加筛选轮次，无需额外费用）；
挑取50-80个蓝斑克隆进行序列测定。 |
4-5周 |
常用于肽库筛选的靶分子：
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分子类型 |
简介 |
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膜受体胞外结构域 |
在文库筛选的体外环境中使用分离的全膜受体作为靶标是有难度的，因为膜受体具有极强的疏水性，仅在脂质双层环境中保持其天然折叠。膜受体通常具有大的多结构域胞外区域，这些区域可能与不同的肽序列相互作用。受体的分离的配体结合结构域是集中选择模拟内源性配体的肽的极好的替代靶点。靶向较短的受体片段也可以提高对高度保守的受体家族的特定成员的特异性。另一方面，与特定受体结构域相对应的合成肽可能采用与天然蛋白质不同的构象，因此所选肽可能无法在其自然环境中识别受体。因此有必要首先针对合成肽筛选噬菌体文库，然后对所得富集文库进行亲和选择，以结合天然蛋白。 |
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针对内源性结合伴侣的中和抗体 |
针对内源性配体的中和抗体可以作为鉴定生物活性肽的替代靶标。抗体的抗原结合区模仿受体的配体结合位点，从而为回收与受体交叉反应的肽提供了“模具”。中和抗体不一定能识别位于配体上的确切受体结合表位，但可能通过与这些区域附近的位点结合来立体阻断配体-受体相互作用，从而发挥其拮抗作用。 |
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全细胞筛选 |
噬菌体文库也可以针对表达感兴趣的膜受体的活细胞进行筛选。这消除了对靶蛋白错误折叠的担忧，并允许针对其天然构象的受体的细胞外区域进行选择。靶向细胞可以是悬浮或者贴壁的。主要目标是寻找与肿瘤特异性受体结合的肽，这些肽可用于药物或诊断试剂的靶向递送。 |
噬菌体展示技术未来前景：
通过筛选噬菌体展示的随机肽文库开发的两种药物是聚乙二醇化促红细胞生成素受体激动剂聚乙二醇苷肽(Hematide, Affymax)和Fc融合的血小板生成素受体激动剂romiplostim (Nplate, Amgen)。另外两种药物，抗TNF-α抗体阿达木单抗（adalimumab）和血浆蛋白酶激肽（kallikrein）的小蛋白抑制剂ecallantide，已经利用噬菌体展示技术开发出来，使该技术与药物发现领域的其他成熟方法并立。
w66最给力的老牌服务优势：
--可溶抗原的快速制备能力：结合公司现有的重组蛋白表达体系，能够在短时间内制备出高纯度、高生物学活性的可溶抗原蛋白，用以支持噬菌体抗体的免疫及筛选工作。
--成熟稳定的免疫文库构建技术：目前w66最给力的老牌获得的噬菌体一级免疫文库的库容可达108-109，其序列丰度>99%，保证直接筛选获得的抗体亲和力达到uM甚至nM级别。
--具备多种筛选体系，包括直接筛选法、竞争法、负筛选法、细胞筛选法等。
--多种预制肽库可选，如：7肽库、环7肽库、12肽库等。
--可提供多肽个性化定制服务及筛选服务。
--多种筛选抗原的筛选可供选择，如：蛋白、多肽、细胞系、原代细胞等。
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