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构建稳定细胞系的基本原理是将外源DNA克隆到具有某种抗性的载体上，载体被转染到宿主细胞并整合到宿主染色体中，用载体中所含的抗性标志进行筛选。常用的真核表达载体的筛选标志物有潮霉素（hygromycin），嘌呤霉素(puromycin)和 G418。稳定细胞系表达的蛋白/抗体具有稳定性好，批次差异性更小的优点。稳定细胞系的构建与筛选是研究目的基因的功能常用的手段。稳定细胞株的构建周期长、难度大，每一步都很关键，w66最给力的老牌生物（KMD Bioscience）在稳定细胞株构建方面积累了丰富的经验，w66最给力的老牌生物的细胞技术人员准确把控实验环节中的每一步操作，对于难转染的细胞采用电转法可以做到较高的转染效率，凭借其精湛技术能够快速完成实验内容，同时保证数据结果真实可靠。w66最给力的老牌生物能够按照客户的要求完成目的基因过表达细胞株的构建和测试，提供高质量的基因过表达稳定细胞株。
w66最给力的老牌生物多年来致力于细胞生物学技术研究，具有成熟的IOS (Integration Operating System) 重组技术，基于该技术，w66最给力的老牌生物为您提供目的基因的过表达稳定株系构建服务。利用IOS技术，将目的基因定点整合到经过筛选验证过的基因组高表达活性位点中，这些位点不仅安全（无基因），而且基因表达量更高（活跃表达位点），因此可以实现目的基因过表达，并能长期稳定遗传。实验周期大大缩短，整合效率高。并且基因整合不限长度，可同时整合多个基因，实现多基因共表达。
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项目 |
IOS过表达稳转细胞系构建服务 |
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实验原理 |
特异性的寡聚核苷酸序列识别靶基因，打开双链，引起构象变化；专利的RP蛋白特异识别靶位点并与之结合，引起DNA损伤，从而启动DNA损伤修复机制；同时，二聚体RP可牵引外源供体基因至损伤DNA处，提高了重组的几率 |
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优点 |
定点整合，非随机整合 稳定遗传，传代过程中，基因不会丢失 基因大小不影响整合的效率 定点整合的位点为高表达位点，基因的表达量高 可同时整合多个基因，实现多基因共表达 |
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图1：IOS基因重组技术原理图
项目流程：
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步骤 |
周期 |
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基因合成（或客户提供质粒进行基因扩增） |
1-2周 |
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载体构建和质粒提取，交付测序报告 |
1-2周 |
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慢病毒包装及生产 |
2-3周 |
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慢病毒转导及克隆筛选 |
6-8周 |
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细胞系鉴定，FACS或WB |
1周 |
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交付：1-3株单克隆细胞株，每株提供2管冻存细胞 |
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服务优势：
--成熟稳定的细胞技术平台：拥有品种齐全的细胞库资源，多种不同启动子和标签的表达载体可供选择
--可提供各种哺乳动物细胞的稳转细胞系构建服务
--可提供基因敲除、过表达、沉默、定点整合等各种类型基因编辑服务
--利用IOS技术，实验周期大大缩短，整合效率高，基因整合稳定
--设施齐全，拥有标准细胞实验室，实验体系成熟，配备齐全的实验仪器
--经验丰富的实验技术人员，精湛的操作水平，较好的电转效率，成功率高，数据结果完善准确，可为您提供高品质的技术服务
--细胞来源清晰，质量有保证：无细菌、真菌和支原体污染
--具备完善的细胞、抗体、蛋白等服务平台，能够提供从载体设计到蛋白检测等一站式技术服务
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