w66最给力的老牌生物科技（天津）有限公司
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经过多年的发展，w66最给力的老牌生物（KMD Bioscience）建立了一套完整的重组蛋白表达和纯化，蛋白发酵，蛋白小试与中试规模的工艺技术支持。w66最给力的老牌的科学家均来自生物制药企业，拥有5-8年的人用蛋白类药物开发经验，深入学习和了解GMP规则下重组蛋白类产品的开发，QC质量控制体系，文件的可追溯性等ICH和GMP指导原则。
w66最给力的老牌生物技术（KMD Bioscience）致力于向用户提供高纯度、低成本的重组蛋白试剂，如蛋白质、细胞因子、各类受体、生物毒性基因、病毒抗原、转录因子、细胞激素等，以满足中下游研究实验的不同需要。w66最给力的老牌交付的蛋白可被用于药物研究、抗体制备、动物实验、ELISA、晶体结构研究、体外酶活测定、细胞实验等。w66最给力的老牌生物（KMD Bioscience）多年致力于重组蛋白表达与制备研究。w66最给力的老牌的科学家拥有丰富的酵母（Yeast）蛋白重组表达、发酵和纯化经验，能够快速为不同客户定制蛋白酵母表达策略，能同时为客户提供多种规格的蛋白酵母发酵规模，如500L发酵罐，配合w66最给力的老牌的蛋白纯化平台，能够在较短周期内获得高质量的重组蛋白产品。
蛋白体外重组表达与制备，通常涉及到表达宿主的选择，基因的合成，载体的构建等技术细节。客户只需要提供w66最给力的老牌一段蛋白序列，CDS或蛋白名称，w66最给力的老牌富有经验的科学家均可以为您在较短的时间内制定一个完整的蛋白表达和纯化方案。
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| 原核表达服务 | 酵母表达服务 | 哺乳动物细胞表达服务 | 昆虫细胞表达服务 |
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优点：遗传背景清楚繁殖快、成本低、表达量高2H/13C/15N同位素标记技术稳定以及适用范围广。 |
优点：1.不会产生毒素，安全性可靠。2.能进行表达产物的加工，保持产品的活性和稳定性。3.表达产物分泌至胞外，有利于纯化。4.遗传背景清楚。5.表达系统相当完整。6.生长增殖迅速。 |
优点：在哺乳动物蛋白质中表达的基因和自然蛋白的结构糖基的种类和形式一致，并能正常重组成多亚基。在悬浮培养基或无人体血清培养基中能获得的高密度,且培养容量可达一千L以上。 |
优点：1.具有很好的安全性，不会造成对人类的危害和环境的污染。2.与哺乳动物细胞表达系统相比，载体构建周期短。3.可容纳较大片段的外源DNA插入，是表达大片段DNA的理想载体。4.能获得重组蛋白高水平表达。5.具有在同一细胞内同时表达多个基因的能力。 |
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缺点：1.没有转录和翻译后加工功能，不能进行糖基化、磷酸化修饰，难以形成正确的空间构象折叠。2.表达的蛋白质经常是不溶的，形成包涵体。 |
缺点：1.外源表达的蛋白易被自身分泌的蛋白酚降解。2.发酵周期相对较长，容易被污染。3.虽然能对产物进行糖基化，但方式是甘露聚糖型，与哺乳细胞不同。 |
缺点：与大肠杆菌相比哺乳动物细胞的表达水平低，获得高表达细胞株所需时间长，规模培养的成本高。 |
缺点：普遍存在于BEVS中重组蛋白易降解的问题。 |
外源蛋白表达系统的差异
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大肠杆菌 |
酵母细胞 |
昆虫细胞 |
哺乳动物 |
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基因转化 |
热冲击 电穿孔 |
热冲击 电穿孔 |
病毒感染 |
脂（质）转染法、电穿孔法、反（转）录病毒、慢病毒、腺病毒 |
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宿主细胞倍增时间 |
10～30 min |
1～3 h |
16～24h |
无 |
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实验时间 |
3～7天 |
1～2周 |
2～4周 |
1～2天 |
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表达水平 |
0.1～1.0 g |
0.1～1.0 g |
0.1～100 mg |
0.01～10 mg |
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总成本 |
低 |
低 |
中 |
高 |
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磷酸化作用 |
无 |
丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸 |
丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸 |
丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸 |
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糖基化 |
无 |
甘露聚糖 |
高甘露糖 |
复杂的 |
常用的表达载体
大肠杆菌蛋白表达系统：pET系列载体是现阶段大肠杆菌表达重组蛋白的首选载体。基础表达水平最低，根据诱导剂（IPTG）浓度调控目的蛋白的表达量；T7 RNA聚合酶机制十分有效并具有选择性，充分诱导时，几乎所有细胞资源都应用于蛋白表达。
酵母表达蛋白系统：胞内表达常用的载体有pPIC3K、pPIC3.5K，分泌表达常用载体为pPIC9K，筛选标记都为His4。
昆虫表达蛋白系统：常见的表达载体有pFastBac1、pFastBacHT以及pFastBacDual，常用的表达细胞是Sf9细胞。
哺乳表达蛋白系统：常用的表达载体有pcDNA3.1、pCEP4、pATX1等，常用的表达细胞为HEK293和CHO-K1细胞。
w66最给力的老牌生物蛋白纯化服务
w66最给力的老牌生物可以提供基于四大表达系统的重组蛋白表达服务，可以根据客户的需求，选择不同的表达策略，纯化策略，助力客户的科研实验。
w66最给力的老牌可提供天然蛋白纯化和重组蛋白纯化服务，公司能提供亲和纯化，分子筛层析，离子交换层析以及疏水层析等。
1 亲和标签蛋白纯化：对于含有亲和标签的蛋白，首先选择亲和层析后根据得到的蛋白纯度和性质以及杂蛋白的位置等，选择多步纯化的步骤。
2 包涵体蛋白纯化：对于包涵体表达的蛋白一般是先进行纯化再复性，对于复性所用缓冲液会进行多重筛选直到选出最适缓冲液，常用的复性方式包括（1）透析和渗滤；（2）梯度复性；（3）基质辅助方法：HIC、SEC等；（4）分子伴侣；（5）小分子助剂等。
蛋白工业级别发酵与冻干平台
与此同时，w66最给力的老牌生物建立了完善的蛋白大规模发酵与纯化平台，能够为客户提供工业级规模发酵技术服务，满足客户对大规模蛋白表达、制备的需要。
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大规模蛋白发酵服务内容 |
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原核蛋白表达系统 |
酵母蛋白表达系统 |
昆虫蛋白表达系统 |
哺乳细胞蛋白表达系统 |
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*基因优化 *表达载体构建 *小试表达鉴定 *表达条件优化 *大规模发酵生产蛋白 *大规模蛋白纯化 |
*基因优化 *表达载体构建 *阳性菌株筛选 *高拷贝菌株筛选 *工程菌株驯化 *表达条件优化 *大规模蛋白表达及纯化 |
*基因优化 *表达质粒构建 *P1代病毒制备与表达小试 *表达优化及测试 *病毒大量制备 *大规模重组蛋白表达及纯化 |
*基因优化 *表达质粒构建 *瞬时蛋白表达 *稳转细胞株筛选 *培养条件优化 *表达条件优化 *大规模蛋白制备及纯化 |
w66最给力的老牌生物定制的高速全自动化灌装线，可定制0.1-10ml西林瓶，配合w66最给力的老牌的大型冷冻干燥设备一次性可为客户提供3ml，10万支西林瓶的蛋白分装与冻干服务。冻干过程是个复杂多变的过程，会有诸多因素影响。w66最给力的老牌生物深耕蛋白研究多年，熟悉冻干机理与操作，能够根据客户的研究需求，提供一套完整的解决方案。w66最给力的老牌可为您选择合适的冻干条件，优化和制定冻干流程，尤其是冻干制剂的研究。基于完备的工艺生产线，w66最给力的老牌也可以直接交付给客户最终的成品。
w66最给力的老牌生物服务特色
--可提供质粒构建、基因表达分析、重组蛋白表达等多样化服务，满足您对于实验的不同需求
--构建了含有低温诱导表达元件的pCold系列载体、改造pET载体获得双表达质粒等，为客户的蛋白表达需求保驾护航
--根据客户样品特点在较短时间内制定完整的构建、表达以及纯化方案。具有丰富的重组蛋白制备经验：已为客户成功制备了数以千记的重组蛋白，包括：重组抗体、分泌蛋白、跨膜蛋白、蛋白酶等，具有高成功率
--拥有多种规格发酵设备：从10L到500L各种规格发酵设备，满足客户对不同发酵体积，不同表达系统的科研、生产需求
--具有高品质的工业生产级别冻干机，可以实现3ml，10万支西林瓶的蛋白冻干服务
--完善的蛋白平台建设，严格的质控体系，技术娴熟的实验人员，可提供与蛋白相关的下游服务
--项目可追踪：定期汇报机制将保证您远程了解实验进展，项目透明化
如何订购？
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