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昆虫细胞表达重组蛋白涉及两代病毒的制备工作，简称为P1和P2代。P1代病毒主要是用于蛋白表达预实验以及扩增P2代病毒，P2代病毒用于大规模蛋白表达制备服务。昆虫细胞蛋白表达系统适合于膜蛋白的重组表达，4次及以下跨膜蛋白几乎可以有效地在昆虫细胞中进行表达和纯化。膜蛋白的纯化是一件比较耗时耗力的事情，w66最给力的老牌生物科技可以提供纯度高达95%的全长膜蛋白定制产品。
昆虫杆状病毒表达系统属于真核表达系统之一，具有外源基因表达水平高、易于表达异源多聚体蛋白、安全性高等特点，重组表达的蛋白产品具有正确的翻译后修饰和生物学活性，如二硫键的形成、磷酸化、糖基化等等。相对于哺乳动物细胞蛋白表达系统，昆虫杆状病毒蛋白表达体系所生产的蛋白，糖基化程度偏低。但是昆虫蛋白表达系统的优势在于，利用病毒进行转染，操作相对容易，转染体系容易形成（相对哺乳动物瞬时转染体系）。w66最给力的老牌生物拥有丰富的重组蛋白昆虫表达（昆虫杆状病毒表达）制备经验，可以为您提供高纯度的全长跨膜蛋白产品，同时为客户提供多种规模的蛋白发酵服务，配合w66最给力的老牌完善的蛋白纯化平台，可以在短时间内为客户提供高质量的重组蛋白产品。
蛋白表达昆虫宿主细胞系：
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细胞 |
来源 |
用途 |
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Sf9 |
* 分离自IPLBSF21-AE |
* 适于转染、纯化、生产高滴度病毒、铺板以及表达重组蛋白 |
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Sf21 |
* 衍生于IPLBSF-21细胞系 |
* 转染、纯化、生产高滴度病毒、铺板以及表达重组蛋白。Sf21细胞在一些结构表达方面优于Sf9细胞，如晶体蛋白 |
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Hi5 |
* 源于白菜尺蠖卵巢细胞，粉纹夜蛾细胞 |
* 适用于重组病毒颗粒表达，也常用于转染和空斑纯化，且Hi5细胞系更适合来表达分泌型重组蛋白 |
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S2 |
* 来源于果蝇晚期胚胎细胞。其中多为雌性四倍体细胞，也有双倍体细胞 |
* 比较适合病毒结构蛋白等重组表达 |
重组蛋白昆虫表达服务步骤：
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步骤 |
服务内容 |
周期 |
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亚克隆 |
* 客户不提供基因模板: 密码子优化，基因合成 * 客户提供质粒：扩增并抽提含有目标基因的载体质粒 * 拼接序列验证：测序 * 交付：正确构建的重组表达质粒及测序原始报告 |
2周 |
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P1代病毒制备与表达小试 |
* 重组Bacmid DNA扩大化培养，并转染昆虫细胞制备P1和P2病毒 * P1代病毒滴度测定（滴度106－108），并验证小量蛋白表达 * 交付：实验报告与图片 |
3-4周 |
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表达优化及测试 |
* P2病毒扩增，病毒滴度测定（滴度107－109） * P2代病毒转染昆虫细胞，蛋白表达纯化 * SDS-PAGE及WB分析 * 交付：图片，实验报告，纯化好的蛋白产品 |
3-4周 |
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大规模重组蛋白表达及纯化 |
* 1L (默认)，5L，10L，30L，80L，130L和250L任选 * 通过亲和，离子交换，疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白 * SDS-PAGE和WB验证蛋白表达 |
协商 |
昆虫表达实验流程：
服务优势：
--提供密码子优化及蛋白分析服务，对于4次及以下跨膜蛋白表达成功率接近100%
--丰富的昆虫表达项目经验，可以提供高纯的全长膜蛋白产品
--多种融合标签载体和宿主，以保证高可溶蛋白表达和高蛋白活性
--多种规模蛋白发酵模式：小规模（500ml，2.5L，10L和30L）、大规模（80L，130L和250 L发酵罐）
--短时间内制备高纯度毫克级，克级重组蛋白
--低内毒素：LAL检测法<0.1EU/ug
--每一步提供详细的实验报告，保证实验数据的可追溯性
如何订购？
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