w66最给力的老牌生物科技（天津）有限公司
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w66最给力的老牌生物（KMD Bioscience）多年来致力于免疫检测产品与技术研究，拥有完善的免疫检测技术、多种细胞学实验体系，w66最给力的老牌生物建立了完善的细胞培养平台，能够提供给客户多种细胞学基础实验，可以提供优质的免疫检测服务—双荧光素酶标记基因检测。w66最给力的老牌拥有众多实验技术人员，积累了丰富的实验经验，对每一个实验步骤均有独到的研究和操作，能够凭借多年成熟技术水平，得到稳定有效的实验结果。w66最给力的老牌生物具备成熟的细胞生物学服务平台，能够提供包括免疫荧光，细胞凋亡检测，荧光原位杂交检测服务，细胞划痕实验，细胞流式检测等多种服务。w66最给力的老牌可以根据客户的实际要求，能制定个性化实验方案供客户选择，节省宝贵的科研时间。
w66最给力的老牌生物提供的双荧光素酶标记基因检测系统是一种基于萤火虫荧光素酶（Firefly luciferase，FLUC）和海肾荧光素酶（Renilla luciferase，RLUC）体内表达和催化的基因报告技术。荧光素酶是生物体内催化荧光素或脂肪醛氧化发光的一类酶的总称，来自于自然界能够发光的生物。荧光素酶是理想的报告基因，因为哺乳动物细胞中不含内源性荧光素酶，一旦转录完成立刻就生成功能性的荧光素酶。荧光素酶催化荧光素氧化，在其氧化的过程中，会发出生物荧光，因此可通过对荧光素酶报告基因的表达检测确认miRNA对靶基因的调控效果。双荧光素酶通常是指萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。二者的催化底物和发光颜色不同，且光吸收波长不同，可在互不干扰的情况下进行检测，且在动物体内无内源性表达，使其在双报告实验中得到广泛应用。
单报告基因实验中往往会受到各种实验条件的影响，w66最给力的老牌生物提供的双荧光素酶标记基因检测优势在于系统中含有在同一细胞中同时表达的两种荧光素酶。通过共转染的“对照”（海肾荧光素酶）作为内参为试验提供一基准线，经过归一化，可以尽可能地减小细胞活性和转染效率等外在因素对实验的影响，减少内在的变化因素所削弱的实验准确性，保证实验数据的可信度。
免疫学检测服务 — 双荧光素酶标记基因检测：
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项目 |
双荧光素酶标记基因检测 |
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实验原理 |
* 该技术实验原理是：将目的基因3‘UTR区域或者lncRNA序列构建至载体中报告基因Luciferase的后面，构建荧光素酶质粒。然后转染至细胞中，通过比较过表达或者干扰miRNA后，检测报告基因表达的改变（以萤火虫荧光素酶为报告基因，以海肾荧光素酶为内参基因）可以定量反映miRNA对目的基因的抑制作用。结合定点突变等方法进一步确定miRNA与靶基因3’UTR的作用位点 |
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应用 |
* 启动子与转录因子相互作用检测
* 潜在增强子/抑制子等调控子核心元件检测
* 潜在启动子/启动子核心区域检测
* 启动子区可能的转录因子结合位点检测
* 病毒/细胞相互作用
* 药物等化学诱导因素对启动子活性的调节（抑制或增强）
* 射线等物理诱导因素对启动子活性的调节（抑制或增强）
* miRNA-靶基因调控验证
* 竞争性内源RNA研究 |
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优点 |
* 优越的灵敏度，高于Western blot 1000倍以上
* 内源性低，哺乳动物无内源性表达
* 荧光素酶检测不受细胞内其他物质影响
* 发光检测，检测方便快捷
* 使用范围广，可检测细胞内任何分子 |
图1 构建载体与转染细胞：分别构建含有萤火虫（firefly）和海肾(renilla)荧光素酶基因载体，共转染细胞。收集细胞裂解液，加入两种酶相应的底物，根据荧光比例进行启动子表达水平定量分析。
双荧光素酶标记基因检测服务主要实验流程：
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实验步骤 |
周期 |
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基因合成及载体构建 |
1-2周 |
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双载体共转染细胞/烟草叶片 |
1周 |
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细胞/烟草培养 |
1-2周 |
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细胞破碎添加荧光素酶底物/烟草叶片涂抹荧光素酶底物 |
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荧光素酶活性检测/荧光强度观察 |
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交付：标准实验报告 |
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服务优势：
--经验丰富的实验操作水平和实验流程，具有可靠的统计学原理，每组实验重复三次
--丰富的实验经验，拥有资深的技术人员和服务部门，实验人员具有多年实验成功经验，能够确保实验数据真实可信，得到理想的实验结果
--拥有完善配套检测设备，进口的仪器试剂，可对结果进一步进行分析
--完整的信息分析，提供详细完整的双荧光素酶标记基因检测实验报告，包括实验数据，图片，结果分析等
--具有成熟的细胞培养平台，能够为客户制定个性化实验方案，提供真正的一站式技术服务体验
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