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支原体（Mycoplasma）是介于细菌和病毒间的、能独立存活的一类最小的原核细胞型微生物，广泛存在于自然界，种类繁多，是生物制品与细胞制剂中最常见的外源性微生物污染因子，因此开展支原体污染检测是细胞质量控制微生物学安全性评价体系中的一项重要内容。w66最给力的老牌生物（KMD Bioscience）的细胞生物学科学家拥有超过10年从业经验。w66最给力的老牌在细胞支原体检测与清除领域累积了多年经验，对于细胞支原体的检测w66最给力的老牌提供多种方法，包括：微生物培养、DNA染色、酶的生化检测、PCR检测、Elisa检测、RNA/DNA杂交、等温扩增法。
支原体污染细胞初期一般不容易观察到细胞增殖和形态的改变；但被支原体严重污染，会导致细胞生长缓慢，折光性降低，细胞间出现膜片状的黏附结构；宿主细胞的核酸蛋白合成受到抑制会产生影响细胞存活的某些酶和细胞因子，使细胞的增殖受到抑制甚至停止，细胞体积变大，细胞碎片越来越多，最终导致细胞死亡。
图1 支原体结构和细胞器
支原体污染的危害及预防措施：
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支原体污染的危害 |
1.改变细胞代谢 支原体会通过消耗培养基中的葡萄糖和氨基酸等营养成分，从而影响细胞生长和增殖；此外支原体还会产生一些对细胞有毒害作用的代谢产物，如过氧化氢、氨 2.改变受感染细胞中基因和蛋白质的表达 支原体可以通过诱导基因表达和可变剪接的变化从而导致细胞功能的改变 3.诱导细胞应激反应 支原体可激活细胞应激通路，导致细胞功能改变和细胞活力降低 4.影响受感染细胞在检测和实验中的行为 支原体污染可能会造成实验出现假阳性或假阴性的出现，有可能导致关于药物疗效或毒性的错误结论 |
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支原体污染的预防 |
1. 实验室环境和仪器设备表面应定期消毒 2. 实验过程应佩戴手套，穿着实验服 3. 细胞培养过程中使用无菌试剂和培养基 4. 使用前确保细胞系无支原体污染 |
支原体检测方法：
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测试方法 |
测试原理 |
优势 |
劣势 |
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微生物培养 |
* 将可疑培养物的上清液转移至特定培养基，随后转移至琼脂；大约 2 周后，支原体污染导致出现“煎鸡蛋”外观的可见菌落 |
便宜、敏感、特异 |
耗时、复杂，只能对某些物种进行特异性识别、速度慢 |
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DNA染色 |
* 细胞培养物用非特异性荧光核酸染料（例如 DAPI）染色，支原体可以被识别为靠近真核细胞但与其细胞核有一定距离的较小点 |
便宜、快速、简单 |
非特异性、低敏感性、主观性、无物种鉴定 |
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酶的生化检测 |
* 支原体产生酶，而这些酶在真核细胞中不存在；这些酶催化底物的周转，导致荧光素酶活性/发光，可在酶标仪上读取 |
快速、简单、便宜、具体 |
无物种鉴定，结果可能因细胞系而异，需要多功能酶标仪 |
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通过 PCR 进行基因检测 |
* 通过对编码支原体 16S rRNA 的特定基因序列进行 PCR 扩增来分析支原体污染；可以使用针对 16S - 23S 基因间区域的特定引物鉴定不同的支原体物种；扩增的 DNA 通常用荧光染料进行定量，无论是在凝胶电泳分离后，在实时 PCR 扩增期间，还是通过在酶标仪上测量终点荧光强度 |
非常灵敏、特异、 快速、提供客观的结果，有商业试剂盒 |
优化取决于经验、检测假阳性/假阴性的风险、需要无 RNAse 处理、需要热循环仪 |
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用ELISA检测表面抗原 |
* 针对支原体表面抗原的抗体用于捕获亚基并主要通过在多功能酶标仪上读取吸光度对其进行量化 |
简单，便宜，适合HTS |
需要多功能酶标仪 |
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RNA/DNA 杂交 |
* 探针与支原体 RNA 或 DNA 杂交；它们可以与特定的物种、组或所有支原体兼容；信号被检测为印迹上的杂交材料点或液体杂交的可检测发射 |
具体、快速、便宜 |
取决于设备和经验，需要无 RNAse 处理 |
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通过等温扩增进行基因检测 |
* 与 PCR 一样，支原体 DNA 被扩增并检测——然而，在等温条件下并使用 4 - 6 个引物；由于较低且恒定的温度就足够了，因此该方法也可以在没有热循环仪的情况下进行 |
参见 PCR，无需热循环仪，运行速度更快 |
需要无 RNAse 处理 |
客户提供：
客户可将需要进行支原体检测或消除的细胞样品提供给w66最给力的老牌，w66最给力的老牌需要100ul-10ml的细胞培养上清进行检测（取决于检测方法），或由w66最给力的老牌进行细胞培养，而客户仅需提供需要培养的细胞信息。
服务优势：
--检测时间短，为您节约宝贵的时间
--完善的实验操作水平，完善的实验条件，严格的细胞实验控制体系，实验人员具有多年细胞实验成功经验，保证您的实验得以良好的完成
--提供详细完整的实验报告，包含实验原始结果，每一项实验参数，可直接用于论文的撰写
--完备的仪器平台：拥有多类型显微镜和流式细胞仪，酶联免疫检测仪等重要仪器，灵敏度高，线性范围宽，重现性好
--提供从细胞培养、细胞染色到图片拍照，数据分析等一站式技术服务
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